Что такое ифа на вич и его особенности

ИФА-диагностика: в чем суть, определение антител, как проводят и при каких болезнях эффективна?

Содержание:

ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических антител (АТ)  и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело», который выявляют при помощи фермента.

Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию.

И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях.

Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

Область применения метода ИФА

Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины.

Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое.

Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных  новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

  • Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
  • Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, гепатиты В и С, хламидиоз, сифилис, уреа- и микоплазмоз, герпетическая и TORCH-инфекции, а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
  • Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших  инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию  формирования  иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

В чем суть ифа?

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что  ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки.

Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами.

Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих  спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд.

  На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Видео: современное проведение иммуноферментного анализа

Результаты ИФА на примере сифилиса

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм сифилиса, а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

  • IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
  • IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
  • IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования.

Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой.

Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.).

К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории.

Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным.

Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок.

Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

  1. Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
  2. Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
  3. Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
  4. Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Ифа находит хламидию, цитомегаловирус и даже паразитов

Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

При внедрении хламидии тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

  • IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
  • IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
  • IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

Что касается цитомегаловируса (ЦМВ), то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс — не дает.

Между тем, определение нормы  титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G.

Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ  возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ).

На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

Алгоритм ИФА-исследований при подозрении на ЦМВ

Читайте также:  Как проводятся анализы кала на кишечную группу?

Что такое паразиты – вряд ли стоит рассказывать, ведь они преследуют человека, начиная с детского возраста и, в полном смысле слова, отравляют ему жизнь (продукты жизнедеятельности паразитов очень ядовиты). Они бывают внушительных размеров (гельминты, а попросту – глисты) или маленькие (амебы, трихомонады, лямблии).

До появления в клинической лабораторной диагностике иммуноферментного метода найти паразитов было весьма сложно, теперь же, как говорят: «Нет проблем!».

А все потому, что есть ИФА, который отыщет паразита, в какой бы форме тот не пребывал (цисты, личинки, яйца или взрослая особь) и в какой бы части человеческого тела не находился.

Для этого нужно лишь взять кровь из вены и найти антитела, которыми организм уже ответил на чужеродные антигены.

О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.

Видео: учебный фильм МГМУ им. Сеченова об основах ИФА

Источник: http://izppp.ru/analizy/ifa/

Иммуноферментный анализ (ИФА) в диагностике ВИЧ-инфекции

Самым распространенным методом диагностики ВИЧ-инфекции является иммуноферментный анализ (ИФА), с помощью которого в сыворотке крови больного выявляются антитела к ВИЧ.

Антитела к вирусу появляются у 90-95 % инфицированных лиц через 4-6 недель от момента заражения, у 5-10% через 3-6 месяцев и у 0,5-1% в более поздние сроки.

В связи с этим, период от момента заражения до появления в крови определяемых с помощью общепринятых методов лабораторной диагностики количеств антител к ВИЧ называется “серонегативным окном”.

В течение этого времени диагноз поставить невозможно, но такой человек может быть источником инфекции и заражать других людей.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет выявлять в крови суммарный спектр антител к структурным белкам ВИЧ.

В том случае если исследуемая сыворотка или плазма дала дважды положительный результат в ИФА, она тестируется в подтверждающем тесте иммуноблота (II этап).

В отличие от ИФА иммуноблот позволяет обнаруживать антитела к индивидуальным белкам вируса. На основании результатов иммуноблота ставится окончательный диагноз ВИЧ-инфекции.

В этом анализе используется два типа реакций: иммунологическая и ферментативная.

Все вариации ИФА основаны на способности антител специфически взаимодействовать только с “собственными” антигенами, т.е. на иммунологической реакции “антиген-антитело”.

Наибольшее распространение получил гетерогенный вариант иммуноферментного анализа, при котором антиген (определяемое соединение) или антитела фиксируется на твердой основе, в качестве которой могут выступать полистироловый планшет, полистироловые бусины, пористая подложка или магнитный носитель. Анализ проводят в 3 стадии.

В лунку планшета, содержащую на своих стенках тот или иной антиген (т.е. один из белков вируса), добавляют исследуемый биологический материал – сыворотку крови больного. При наличии в организме инфекционного агента, в сыворотке появляются антитела к нему.

Они прочно связываются с антигеном и не удаляются при последующей промывке чашки.

На следующем этапе необходимо определить, образовался или нет в лунке иммунный комплекс, то есть произошло ли соединение антигена с антителом. Простым глазом или под микроскопом это нельзя увидеть, поэтому требуются следующие две стадии, которые можно назвать проявляющими.

На второй стадии анализа в лунку вносят специальные (реагирующие с разными антителами) антитела с заранее прикрепленным к ним ферментом (поэтому метод называется ферментным). Слитый в единый комплекс “антитело-фермент” (конъюгат) способен связаться с антителами, уже зацепившимися за антиген, который закреплен на твердой подложке.

В результате возникает “молекулярная цепочка”, на одном конце которой вирусный белок, а на другом – фермент. После отмывки весь этот многослойный “пирог” остается в лунке планшета. Теперь нужно обнаружить активность фермента, чтобы сделать вывод о наличие антитела.

Для этого на третьей стадии в ту же лунку вносят раствор субстрата и специального бесцветного вещества – хромогена, который способен окрашиваться в результате серии биохимических реакций, осуществляемых присутствующим в лунке ферментом. Если в лунке появляется окраска, это означает, что все элементы цепочки присутствуют.

Из этого следует вывод: в крови пациента имеются антитела к антигенам ВИЧ и, следовательно, сам пациент инфицирован этим вирусом.

Существуют и другие варианты метода ИФА. Например, можно детектировать не антитела, а сам антиген. Процедура в целом будет похожей, хотя немного более сложной.

Результаты анализа могут быть положительными, отрицательными или сомнительными.

При отрицательном результате и отсутствии подозрения на недавнее (в течение последних 6 месяцев) заражение, можно считать диагноз ВИЧ неподтвержденным. Если есть подозрение на недавнее заражение, проводят повторное исследование.

ИФА может дать как ложноотрицательный, так и ложноположительный результат.

Ложноотрицательный результат ИФА возможен при свежем инфицировании, пока антитела к ВИЧ еще не выработались организмом больного.  

Ложноположительные результаты могут быть получены при обследовании больных хроническими заболеваниями и в некоторых других случаях:

  • Административная ошибка в клинике или лаборатории (на пример, путаница в маркировке образцов или бланков) может привести к неверным результатам, сообщаемым лицам, проходящим тестирование на ВИЧ-инфекцию. Поэтому рекомендуется у всех пациентов с положительной реакцией на на­личие антител к ВИЧ взять еще одну пробу крови и исследо­вать ее на антитела к ВИЧ по той же методике.
  • Наиболее распространенной причиной ложноположительного теста является вакцинация. Однако описан один случай такого результата при заболевании системной красной волчанкой и в терминальной стадии заболевания почек.

Поэтому при получении положительного результата ИФА его обязательно перепроверяют более чувствительными методами.

Источник: https://www.eurolab.ua/aids/2878/2888/35442/

Ифа анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, вич, туберкулез. норма в таблице, результаты

Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.

Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.

Что такое ИФА

ИФА анализ — это такоелабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.

Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.

ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.

Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.

Виды иммуноглобулинов

Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.

Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:

Кол-во в организме Функции Период полураспада (дней) Значение
G 70% Формируют пассивный иммунитет у новорожденного;необходимы для иммунного ответаулучшают фагоцитоз, 21-24 обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях
М 5-10% нужны для активации фагоцитоза,способны связать 5 молекул антигена, 5 Обеспечивает первичную иммунную реакцию
А 10-15 Нейтрализуют токсины и вирусынужны для формирования раннего иммунитетаОбразование местного иммунитета 4-5 Защита слизистых оболочек
Е 0,2% вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы 2 Защита от паразитов
D 0,2% задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов; 3 Их роль малоизучена

Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.

Показания к сдаче анализа на иммуноглобулины

ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.

Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:

  • вирусный гепатит;
  • ВИЧ-инфекция;
  • цитомегаловирус,
  • вирус Эпштейна-Барр,
  • вирус герпеса,
  • корь
  • краснуха,
  • туберкулез,
  • сальмонеллёз,
  • дизентерия,
  • клещевой энцефалит,
  • бактерии хеликобактер,
  • боррелиоз,
  • столбняк,
  • сифилис,
  • дифтерия,
  • лептоспироз,
  • хламидиоза,
  • уреаплазмоз,
  • микоплазмоз,
  • коклюш.

Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:

  • плоскими червями
  • аскаридами
  • гистолическими амебами,
  • печеночными тремадами,
  • лямблиями,
  • токсоплазмами,
  • трихинеллами,
  • двуусткой,
  • цестодозами.

ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.

Подготовка к сдаче анализа

При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:

  • за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
  • не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
  • стараться не допускать стрессов,Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.
  • прекратить употребление лекарственных средств не позже чем за 10 дней до манипуляции.

Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.

Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.

Порядок взятия пробы

В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.

Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.

Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.

Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 оС, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 оС.

Читайте также:  Особенности орви при беременности 2 триместр лечение и профилактика

Как делают анализ

После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.

Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:

  • Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
  • Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
  • Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.

В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.

Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.

При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.

Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.

При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.

Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.

Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.

Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.

Когда будет готов анализ

Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.

Результаты теста и их расшифровка

На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.

Возможны различные интерпретации результатов:

  1. IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
  2. IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
  3. IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
  4. IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
  5. IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
  6. IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.

Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:

  • вирусный гепатит;
  • цитомегаловирус;
  • герпес;
  • ветряная оспа;
  • хламидиозом;
  • стафилококковая или стрептококковая инфекция.

Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:

Название гормона Пол Норма
1 тиреоглобулин м/ж До 70 МЕ/мл
2 тироксин м/ж 64-146 нмоль/л
3 трийодтиронин м/ж 1,8-2,8 нмоль/л
4 Свободный тироксин м/ж 11-25 пмоль/л
5 Свободный трийодритонин м/ж 4,49-9,3 пмоль/л
6 Тестостерон, дегидротестостерон Ж 0,5-10 мЕд/л

ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.

Значение результатов теста

ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.

Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:

  • иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
  • IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
  • IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.

В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.

Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).

В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).

При получении положительных проб далее следует:

  • если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
  • повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
  • при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.

ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.

ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.

Хламидии Цитомегаловирус Паразиты
IgM –обнаруживается через 7 дней после инфицирования, IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев В ходе исследования определяются IgMЕ.IgG- хроническая стадия инвазии
IgA – заражение произошло более 30 дней назад
IgG – инвазия находится в острой фазе
IgG – подтверждает диагноз и показывает эффективность терапии

Плюсы и минусы анализа

ИФА имеет множество достоинств, что и объясняет его популярность среди врачей и пациентов, это:

  • высокая точность результата,
  • доступная цена,
  • быстрый результат,
  • выявление стадии заболевания,
  • контроль заболевания в динамике.

Однако наравне с достоинствами существует и недостаток – в редких случаях анализ бывает ложноположительным или ложноотрицательным.

Почему результат может быть недостоверным

Ошибки в результате могут возникать из-за технических нарушений, так же недостоверным анализ бывает у людей с некоторыми хроническими заболеваниями (ревматоидный фактор) для которых характерной является выработка специфических антител.

Так же на конечный результат оказывает влияние употребление пациентов медикаментов и нарушение метаболизма. По данным причинам положительный результат на ВИЧ и онкопатологии требует повторную сдачу проб.

Стоимость исследования

Цена ИФА варьируется в зависимости от направления диагностики (руб.):

  • гепатит 250 -900;
  • вирусы – 250 -1000;
  • ВИЧ – 250-350;
  • глистные инвазии – 280 — 900;
  • сифилис -150-250;
  • грибковые инфекции 400-500.

Иммуноферментный анализ крови один из самых эффективных методов исследований множества вирусных патологий, паразитарных инфекций, онкологических патологий. Такое исследование как ИФА во многом облегчает постановку диагноза, однако этот анализ не должен интерпретироваться пациентом самостоятельно, заниматься расшифровкой должен только врач.

Источник: https://healthperfect.ru/ifa-analiz.html

Иммуноферментный анализ: область применения и суть, ИФА-диагностика на примере сифилиса, ВИЧ и других вирусов

Иммуноферментный анализ (ИФА-диагностика) — современный метод лабораторного диагностирования, который идентифицирует специфические антитела крови и антигены определенной болезни.

[list h2 h3]

Данный метод используется в медицине с 1960 годов. Изначально он имел очень трудоемкую специфику исследования, поэтому его массовое применение считалось затруднительным.

Благодаря усовершенствованию микротехнологий, открытию новых биополимерных материалов, стало возможным использование ИФА массово. Это произошло в 1980 году.

В первую очередь ИФА-анализатором были оборудованы центры переливания крови и венерологические отделения.

Область применения ИФА

Применение иммуноферментного анализа очень обширно, а область его применения охватывает почти всю медицину. Особенно важен ИФА в онкологии, когда возможно определить начало заболевания на самых ранних стадиях.

В клинической диагностической лаборатории существует множество панелей иммуноферментного анализа для выявления и ранней диагностики инфекционного процесса, гормональных сбоев, аутоиммунных заболеваний, венерических болезней. ИФА-диагностикой пользуются при тестировании лекарственных препаратов, их воздействия на организм человека. Область применения ИФА-диагностирования весьма обширна и может применяться для выявления:

  • нарушения репродуктивной функции;
  • нарушения в щитовидной железе;
  • нарушения иммунной системы;
  • инфекционные заболевания;
  • маркеры онкологических заболеваний.

И это список самых распространенных анализов. Полный список иммуноферментного анализа довольно большой и постоянно обновляется.

Суть ИФА-диагностирования

Иммуноферментный анализ состоит из двух компонентов: иммунной реакции и ферментативной реакции. Эти обе части данного метода работают сообща. Иммунная реакция находит болезнетворные микробы и микроорганизмы, а ферментативная реакция переводит полученные результаты в измеримую форму. Совмещаясь эти обе реакции, являют собой собственно сам ИФА.

[su_youtube_advanced url=»https://www.youtube.com/watch?v=-Z0hoaIPmS4″ width=»560″ https=»yes»]

ИФА различают как прямой и непрямой, конкурентный и неконкурентный. При прямом ИФА берут антитела к нужному антигену и соединяют между собой ферментативной реакцией. При непрямом методе ИФА производится двойной контроль.

Все тест-системы для проведения иммуноферментного анализа проходят тщательную диагностику и укомплектацию необходимыми реагентами. При проведении ИФА нужно сверять результат с конкретной тест-системой, на которой проводится анализ, так как у каждой тест-системы свои показатели.

Результаты ИФА-диагностики на примере сифилиса

Чтобы определить наличие сифилиса, необходим иммуноферментный анализ. Кровь пациента берется из вены, натощак. Для проведения анализа используется панель со специфичностью АТ классов A, M, G.

Антитела при сифилисе производятся в конкретной последовательности, поэтому благодаря ИФА можно точно определить, когда настало заражение и какая стадия болезни на данный момент у пациента.

На планшете ответ на анализ на сифилис будет иметь следующий вид:

  • отрицательный результат оставит лунки бесцветными;
  • положительный результат окрасит лунки в желтый цвет.

Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна зависимости связанных между собой антигенов и антител.

ИФА-диагностирование на ВИЧ-инфекции

В мире, где заразиться ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека) возможно даже от похода к зубному, очень остро стоит вопрос о диагностики этого заболевания. Сейчас пройти исследования крови на ВИЧ возможно в анонимной лаборатории.

Читайте также:  Пузырчатка вирусная — проявление у детей

Кровь берется из вены. Целесообразно проводить ИФА-диагностику на ВИЧ после переливания крови, полового акта без презерватива и т.д. Обязательно стоит учитывать инкубационный период заболевания. Он может составлять от 40 до 95 дней.

Если все-таки определяется ВИЧ, то для постановки окончательного диагноза проводится тщательное лабораторное обследование. Кровь из первого забора подвергается повторной перепроверке на новой тест-системе.

Если положительный результат повторяется, кровь у пациента берется повторно и тестируется. В случае повторного положительного результата, кровь тестируют особо чувствительной тест-системой 3 раза подряд.

Если результаты теста повторяются, проводят иммуноблотинг и только после этого дается окончательный ответ.

ИФА-диагностика на хламидии, цитомегаловирус, паразиты

Такие серьезные заболевания, как цитомегаловирус и хламидиоз, возможно определить иммуноферментным анализом с точностью до дня инфицирования, а также в какой стадии данное заболевание сейчас находится, какое лечение будет наиболее эффективно.

Когда в анализе определяется хламидия, появляются антитела класса А, М, G:

  • антитело (IgM) определяется в первые дни инфицирования;
  • антитело (IgA) определяется после 30 дня инфицирования;
  • антитело (IgG) определяется независимо от времени инфицирования. Иммуноглобулины этого вида находятся в организме и помогают отслеживать лечение.

С цитомегаловирусом сложнее. ЦМВ проявляется в IgM, когда заболевание уже циркулирует в организме больше месяца. И наоборот — IgG определяет развитие начальной (острой) стадии болезни или повторное реинфицирование вирусом.

При исследовании иммуноферментного анализа на IgG необходимо учитывать авидность антитела IgG. Если антитело низкоавидное, это значит, инфекция находится на первичной своей стадии.

Высокоавидный IgG показывает хроническую форму заболевания, также это показывает сформированный устойчивый иммунитет.

Благодаря изобретению иммуноферментного анализа люди получили возможность диагностировать огромное количество опасных заболеваний. Сейчас можно сдать кровь (берется только кровь из вены) в любой диагностической лаборатории и получить достоверный результат в короткие сроки.

Источник: https://myvenerolog.ru/ifa-diagnostika/

ифа на вич

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет выявлять в крови суммарный спектр антител к структурным белкам ВИЧ.

Сдавая анализы всегда хочется получить только достоверные ответы. Особенно, когда проводится исследование на иммунодефицит. Именно в таком случае важна точность тестов на ВИЧ, ведь от этого зависит дальнейшее здоровье человека и его родных.

Тестирование на ВИЧ делают практически в каждой клинической лаборатории. Для этого достаточно сдать небольшое количество крови и подождать несколько дней до выдачи результата.

ИФА анализ на ВИЧ самый распространенный метод анализа помогающий выявить антитела на вирус, что подтверждает его наличие в организме зараженного.

Что такое ИФА

Этот метод исследования делает иммуноферментный анализ, который строится на обнаружении антител. Этот метод обладает иммунохимической реакцией, что позволяет увидеть с каким антигеном связано антитело. Этот анализ считается одним из наиболее точных и удобных. Его используют даже в случае, когда методом ПЦР после вирусной нагрузки не удалось получить точный ответ.

Самый распространенный гетерогенный вариант ИФА. В нем кровь пациента смешивают с антигеном и добавляют антитела, помогая создать молекулярную цепочку. Именно в ней и можно обнаружить белок вируса и доказать, что ВИЧ в организме человека есть.

Когда проводят ИФА

Так как вирус не виден сразу после возможного заражения, необходимо некоторое время для его размножения и выявления. Только исследования помогают дать более достоверный ответ.

В зависимости от концентрации вируса в организме и способа его попадания, он может проявиться спустя пару недель или несколько месяцев.

Определить когда он точно проявится никто не знает, у каждого инфицированного индивидуальный срок.

Поэтому советуют делать анализ ИФА несколько раз. В основном его рекомендуется проводить через 6 недель, через 3 месяца и через полгода. Именно такой период, от попадания вируса в организм и до его выявления, будет серонегативным окном. Поэтому в период окна проводят ИФА анализ на ВИЧ.

Зарубежные врачи рекомендуют делать анализ на ВИЧ через 3 месяца, игнорируя полугодовой анализ. Но многое зависит от самого ИФА и его поколения. Тем более люди постоянно волнуются и боятся, что ВИЧ не проявит себя за это время.

Чтобы действительно быть уверенным и успокоить себя, проходят этот анализ трижды.

Особенности ИФА

Этот метод исследования обнаружили несколько десятков лет назад. Действительно первое поколение ИФА было не таким чувствительным, что требовало многократной сдачи анализов в разные сроки. Ведь только большая вирусная нагрузка помогала выявить ВИЧ ИФА. Это было не очень удобно, приходилось долгое время жить в волнении и постоянном страхе за свое здоровье.

Поэтому ИФА не стоял с тех пор на месте. Даже сейчас он продолжает развиваться, искать новые возможности для более быстрого и точного исследования и выявления вируса. Это поможет обнаружить его в более краткий срок после заражения и начать раньше принимать препараты для его подавления.

На данный момент существует уже 4 поколения ИФА. Чем выше поколение, тем более точным и быстрым будет анализ.

Современные анализы ИФА помогают выявить антиген р24, который появляется раньше антител вируса. Именно это позволяет увидеть проявление вируса раньше, чем это было в прошлые годы.

Возможно через некоторое время появятся еще несколько поколений, которые смогут выявить ВИЧ уже в начале заражения.

Если анализ ИФА положительный

Если результат пришел положительным, то не стоит сразу приступать к лечению паразитов – необходимо сопоставить клиническую картину, результаты ИФА и, возможно, результаты других методов обследования.

В случаях, когда ИФА на ВИЧ положительный, не стоит впадать в паническое состояние. Возможно человек не прислушался к советам по подготовке перед сдачей анализа или он переболел острой вирусной инфекцией. Именно это может дать такие нежеланные положительные результаты.

В такой ситуации назначают дополнительный повторный тест с другими методами исследования. Часто применяют метод иммуноблотинга, когда ищет антитела к индивидуальным белкам вируса. Достоверность такого исследования довольно высока и позволяет с точностью сказать о присутствии или отсутствии вируса в организме.

Подготовка к ИФА

Чтобы ИФА тест на ВИЧ получился правдивым и точным, желательно прислушиваться к советам врачей по подготовке к анализу. Это помогает избежать ложноположительных результатов и лишних ненужных волнений. Поэтому важно заранее подготовить организм.

Не рекомендуется принимать алкогольные напитки непосредственно за сутки перед сдачей теста. В идеале для этого желательно несколько дней. Также не стоит слишком плотно наедаться перед тестом. Последний прием пищи возможен за 8 часов до сдачи крови на исследование. Обычно сдают ее утром, поэтому последний прием пищи приходится на ужин. А утром кровь сдают уже натощак.

Если человек переболел острым вирусным заболеванием, достоверность его анализов резко уменьшится. Желательно посоветоваться с врачом по этому поводу или сделать тест несколько позже, когда организм полностью освободится от остаточного явления острой вирусной болезни. Но в случае повторного теста могут использовать другой метод, позволяющий достоверно проверить наличие или отсутствие вируса.

Беременность и ИФА

Беременные женщины обязательно сдают некоторые анализы и среди них ИФА анализ на ВИЧ. Но это время имеет свои особенности, ведь беременность может влиять на точность результатов по ВИЧ. Именно поэтому, казалось бы здоровая женщина, получает положительный анализ на ВИЧ.

Но не стоит отчаиваться и волноваться за свое здоровье и самочувствие будущего ребенка. Такие ложные анализы могут быть не по вине сотрудников лаборатории, а из-за особенного состояния матери. Некоторые проходящие в это время процессы в ее организме существенно влияют на результат.

Вероятность передачи вируса от матери к плоду не стопроцентная, она равняется около 30%.

Бывает, что организм женщины воспринимает тело малыша как инородный предмет и начинает вырабатывать на него антитела. Если срок довольно маленький, а антител уже много, то часто могут происходить выкидыши. Поэтому желательно становиться на учет в самом начале беременности.

Также в это прекрасное для женщины время ее организм несколько слабеет, иммунная система тоже, а хронические заболевания этим пользуются, стараясь сильнее воздействовать на здоровье.

Из-за таких ситуаций и возникают ложноположительные результаты. Но не стоит волноваться. Достаточно сдать анализ еще раз и все выяснится.

Где сдавать анализ на ВИЧ

Так как метод исследования ИФА распространенный, то его применяют в каждой лаборатории. Поэтому выбор места для сдачи крови на ВИЧ каждый выбирает себе самостоятельно. Необходимо лишь узнать время приема анализов и адрес.

По желанию можно посетить Центр СПИДа и сдать тест именно там, ведь работа этого учреждения направлена именно на это заболевание и решение проблем с ним. Исследование в нем ничем не отличаются от исследований в других лабораториях.

В среднем для получения анализа необходимо около 5 дней. Но некоторые лаборатории могут делать его за 3 дня. Стоит понимать, что возможны случаи, когда ответ затягивается на больший срок. Но это не означает, что результат обязательно будет положительным. Возможно ккая-то ситуация в лаборатории или большой наплыв анализов не позволяют сделать это быстро.

Что делать при положительном ИФА

Если анализ ИФА получился положительным, то назначают повторный анализ. Так делают всегда, чтобы исключить возможные ошибки со стороны пациента и человеческий фактор медицинских сотрудников. В этом случае исследования могут проводить другим методом.

Если же при повторном анализе получился положительный результат, то стоит обратиться к врачу. Он назначит соответствующее лечение и будет прослеживать состояние инфицированного. Препараты и дозировка подбираются индивидуально для каждого. Все зависит от вирусной нагрузки и особенностей организма.

Если анализы вызывают сомнение, человек может сдать их в нескольких лабораториях и затем при получении результатов сравнить. Но случаи ошибки довольно редкие и в основном результаты достоверны. Если у одного партнера был выявлен ВИЧ, то другому желательно тоже пройти исследование.

Положительный ИФА на ВИЧ не всегда говорит о том, что человек инфицирован.

При правильном лечении, подавляется распространение вируса и человек может спокойно жить дальше. Если он не расскажет о своем заболевании, то никто этого и не узнает, ведь врачи не имеют права раскрывать врачебную тайну. Но желательно обезопасить своих близких и родных, принимая все меры безопасности.

Источник: https://hiv.uef.ru/2018/07/24/ifa-na-vich/

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector